Villa María - Córdoba - Argentina




  22.10.2015
EL AUMENTO DE NEUTRÓFILOS TLR-9 POSITIVOS SE ASOCIA A
MAL PRONÓSTICO EN PACIENTES CON SEPSIS
AUTORES: Marianella Fernandez de Larrea (1),
Beatriz M.I. Pereira (2),
Claudia B. R. Aimaretto (3),
Carolina A. Manera (1),
Mónica Bellotti (3),
Analía S. Trevani (4),
Susana E. Gea (5) y
Laura Giordanengo (3).

1. Laboratorios Camperchioli, Villa María, Provincia. de Córdoba, Argentina.
2. Laboratorio de Inmunología, Hospital de Niños de la Santísima Trinidad, Córdoba Capital, Argentina.
3. Laboratorio Central, Hospital Regional Pasteur, Villa María, Provincia. de Córdoba, Argentina.
4. Instituto de Medicina Experimental, CONICET, Academia Nacional de Medicina, Buenos Aires, Argentina.
5. Dpto. Bioquímica Clínica, CIBICI-CONICET, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Córdoba Capital, Argentina.

Introducción:

La sepsis es considerada actualmente como un desequilibrio entre reacciones pro-inflamatorias y las respuestas
antiinflamatorias. Uno de los mecanismos que utiliza el sistema inmune para eliminar los microorganismos que invaden el cuerpo es el
reconocimiento de los PAMPs (Patrones Moleculares Asociados a Patógenos) por los PRRs (Receptores de Reconocimiento de Patrones), de
los cuales los más conocidos son los receptores tipo toll (TLRs). La interacción de los TLRs con los PAMPs desencadena la activación de una
cascada que conduce a la síntesis y liberación de mediadores inflamatorios responsables del daño endotelial, coagulación intravascular
diseminada e hipoxia tisular que llevan al fallo multiorgánico y muerte en la sepsis.
Las células del sistema inmune que expresan el TLR-9 son las células dendríticas, linfocitos B, células NK, macrófagos, monocitos y
neutrófilos. También está presente en células estructurales, incluyendo las células epiteliales alveolares y células endoteliales. El TLR-9 está
localizado intracelularmente dentro de las vesículas endocíticas y en la superficie celular, y reconoce patrones del ADN microbiano (motivos
CpG no metilados), liberado de las bacterias, virus u hongos durante una infección, como también del ADN de células propias como resultado
de enfermedades autoinmunes u otras.

Objetivo:
Estudiar la contribución del TLR-9 en la patogénesis de la sepsis en humanos determinando si existen diferencias significativas en la
expresión del TLR-9 intracelular y en superficie en leucocitos de sangre periférica de pacientes con sepsis en relación a individuos normales.
Materiales y métodos: 14 pacientes sépticos y 14 individuos normales provenientes del Hospital Regional Pasteur de la ciudad de Villa María,
provincia de Córdoba, Argentina fueron incluidos en este trabajo. La expresión del TLR-9 fue analizada por citometría de flujo a nivel
intracelular y en superficie de leucocitos totales provenientes de sangre periférica. La producción de interleuquina-6 se determinó en suero
por enzimoinmunoensayo. Los parámetros bioquímicos se evaluaron utilizando autoanalizadores y siguiendo la técnica según el fabricante.
Además se procesaron muestras para cultivo de los pacientes y se identificó el agente patógeno causante de la sepsis.

Resultados:
Los pacientes sépticos presentaron mayor cantidad de leucocitos que expresan TLR-9 tanto a nivel intracelular como en
superficie respecto a individuos normales. La población de neutrófilos representó la mayoría de las células TLR-9 positivas . Los
marcadores inflamatorios eritrosedimentación, proteína C reactiva e interleuquina-6 se encontraron aumentados en pacientes con sepsis .
Además, se detectó leucocitosis, anemia, hiperglicemia, hiperbilirrubinemia, elevación de urea y creatinina y alteraciones de la coagulación .
Los microorganismos aislados fueron bacilos Gram-negativos con predominio de Pseudomonas aeruginosa

Conclusión:
Demostramos que en los pacientes sépticos se incrementan los leucocitos TLR-9 positivos siendo los neutrófilos la principal población hallada con expresión del receptor TLR-9 tanto a nivel intracelular como en la superficie de las células. Cabe destacar que no se observaron diferencias significativas en cuanto a la intensidad de fluorescencia media por célula entre los dos grupos de pacientes. Por lo tanto, el aumento en la expresión del receptor en la sepsis se debe a la aparición de nuevas células que lo expresan como consecuencia de la leucocitosis característica de estos pacientes, en lugar de un aumento de la expresión de TLR-9 en la célula.
En nuestro grupo de pacientes sépticos los resultados demostraron altos niveles de IL-6 presentes en suero, sosteniendo que al menos en parte, la producción de esta citocina inflamatoria podría estar dada por la activación del TLR-9 y está descripto que la medición de la concentración de esta citoquina en sangre puede ser útil para la detección temprana y el pronóstico en pacientes con septicemia.
Nuestros resultados indican claramente que en los pacientes estudiados con diagnóstico de sepsis se desarrolla una importante respuesta
inflamatoria que conduce al fallo multiorgánico y los predispone a la muerte. En este sentido, de los 14 pacientes estudiados, 12 murieron en el hospital a los pocos días de haber tomado la muestra y 2 fueron trasladados a otros centros de salud por lo que se desconoce su desenlace.
En concordancia con la respuesta inflamatoria marcada que presentaron nuestros pacientes con sepsis se revelaron valores muy elevados de VSG y PCR en el presente estudio.
Pudimos lograr la confirmación microbiológica de sepsis en 12 de los 14 pacientes estudiados. En este estudio los microorganismos aislados fueron bacilos Gram-negativos con predominio de Pseudomonas aeruginosa.
El bloqueo del TLR-9 podría ser una opción terapéutica para evitar o atenuar el desencadenamiento y consecuencias de esta patología. Se demostró que el bloqueo del TLR-9 atenúa la disfunción cardíaca en ratones sépticos a través de la modulación del TLR-9 por CpG-ODN, proponiéndose a este ligando como un tratamiento eficaz para pacientes con sepsis o shock séptico.
A través de este trabajo, hemos demostrado que en la sepsis humana se produce un aumento de la cantidad de células en sangre periférica que expresan el TLR-9 en un contexto inflamatorio nocivo para el paciente que impide la resolución de este proceso.


















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